转染效率低

没有使用合适的转染试剂。

选择针对你的细胞类型转染效率可能最高的GenEscort转染试剂。参见我们公司网站（www.wisegen.com）上“已成功转染的细胞列表”

没有使用优化的条件。

优化GenEscort试剂和DNA的量。在转染不同细胞时，对不同品质的DNA可能有不同的DNA用量。一般先设置三个水平的DNA量，按DNA : GenEscort (mg : μl)=1:2 优化，得到最优化的DNA用量后，在该DNA用量下再优化DNA : GenEscort (mg : μl)的比列一般为1 : 2－1 : 4。对绝大多数细胞采用说明书上的方法可以得到较好的转染效果。

不恰当的细胞密度。

 

细胞密度应该在转染时融合度为70％－90％。

DNA－转染试剂复合物在存在血清条件下形成。

在配制DNA－转染试剂复合物时，不要使用血清。可以用细胞培养时常用的PBS或不含血清的培养基稀释DNA和GenEscort 转染试剂。DNA－转染试剂复合物经10－15分钟静置后，可以用含血清的完全培养基稀释加入细胞培养板，转染过程中可以使用血清。

DNA－转染试剂复合物形成时没有充分混匀。

一般推荐将DAN和转染试剂分别在一定量的PBS或不含血清的培养基中稀释，然后将二者再混合，这样有利于形成合适的纳米颗粒，但请注意每个稀释步骤与二者混合过程一定用合适与你要混合的液体量大小的枪吸打多次。在充分混合的前提下，可以简化操作，将DNA加入稀释剂中，轻轻混匀后，直接加入转染试剂，轻轻混匀，静置10－15分钟也可以形成稳定的纳米颗粒。

转染DNA的启动子－增强子没有被宿主细胞识别。

 

确保转染DNA的启动子－增强子同目的细胞类型兼容。

转染分析的问题

转染分析中加入阳性对照，例如GFP Gene或luciferase Gene 以便检查转染结果。

 

质粒纯化的问题

最好使用转染级的质粒纯化试剂盒，通常转染级的质粒纯化试剂盒使用DEAE树脂而非硅胶树脂，并且最好是用重力流动（过滤）的方法而不是离心技术，因为树脂带来的污染会导致较高的内毒素。另一种方法（可用于任何级别的纯化试剂盒），是在最后一步从树脂柱上洗脱质粒后，将溶液置于55℃的水浴上保温5分钟。最后小心地从上吸取2/3的溶液（不要碰到底部）使用。这是减少树脂的交叉污染的方法。通常使用酚－氯仿沉淀法提取DNA做转染也可以得到满意的结果，但DNA的用量较大一些，经常是前者的一倍量，OD₂₆₀/OD₂₈₀的比值应大于1.8。

转染时细胞培液的体积

对某些细胞，减少转染时细胞培液的体积可以提高转染效率。

细胞毒性大

细胞的状况不佳

接种前，细胞的健康状况直接影响细胞毒性，应该接种处于正常生长的细胞。

 

DNA 量太高

做一个计量－反应曲线以确定最佳的DNA量，然后在保持GenEscort/DNA 比率的同时减少质粒的数量。因为单独DNA也会对细胞生长有一个基础的影响。

GenEscort 试剂用量太大

GenEscort量太大，导致在转染复合物中有大量未与DNA复合的自由阳离子聚合物存在，研究证明这些自由阳离子聚合物会增加细胞毒性。做一个计量－反应曲线以确定最佳的GenEscort量，同时核准DNA的浓度，确保 GenEscort^TM/DNA 比率合适。

 

细胞太少

做一个计量－反应曲线以确定每个转染过程中的最佳细胞数量。根据您的应用所要求的效率调整细胞数量。

GenEscort/DNA复合物与细胞的培育时间未优化

对一些脆弱的细胞，减少GenEscort/DNA复合物与细胞的培育时间，转染4小时后可以更换培养基。

表达的蛋白对细胞有毒性或质粒不纯。

确定基因表达产物是否有毒性，如果表达的蛋白对细胞有毒性，应该减少转染实验中所用的质粒DNA用量。

确认质粒没有内毒素。

转染结果不重复

在培养中细胞发生变化。

细胞传代次数多，细胞老化，或者细胞分裂条件已经变化。在这种情况下，如果转染结果不可重复，可能是细胞状态不佳，应该从液氮罐里取一只新的细胞株培养并用于转染实验。

 

转染时的参数波动。

在不同的GenEscort/DNA比或不同的细胞密度下，转染效果可能差别较大。所使用DNA的品质变化，所用培养基的改变以及GenEscort/DNA比的不同都可能导致转染结果的不重复。